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 附：磺胺嘧啶锌软膏无菌检查法 |
新药转正标准 |
拼音名：
英文名：
书页号：X2-53
标准编号：
磺胺嘧啶锌软膏是磺胺类药物，其主药磺胺嘧啶锌的磺胺嘧啶部分和锌均有抑菌作
用；主药不溶于水，其基质是水包油型乳剂。根据《中国药典》1990年版二部附录《无
菌检查法》和卫生部《药品卫生检验方法》1990年版中《供试液的制备》和《稀释剂》
的有关部分制定本法。
培养基及其制备方法
1.需气菌、厌氧菌培养基
酪胨（胰酶水解） 15g 氯化钠 2.5g
葡萄糖 5g 新鲜配制的0.2％亚甲蓝溶液 0.5ml
L-胱氨酸 0.5g 琼脂 0.5-0.7g
硫乙醇酸钠 0.5g 对氨基苯甲酸 0.125g
酵母浸出粉 5g 水 1000ml
除葡萄糖和亚甲蓝溶液外，取上述成分加入水内，微温溶解后，调节pH为弱减性，
煮沸，滤清，按量加入葡萄糖和亚甲蓝溶液，摇匀，调节pH值使灭菌后为7.1±0.2，分
装，115℃灭菌30分钟。
2.霉菌培养基
胨 5g 硫酸镁(MgSO4?7H2O) 0.5g
葡萄糖 10g 对氨基苯甲酸 0.125g
磷酸二氢钾KH2PO4 1g 水 1000ml
除葡萄糖外，取上述成分加入水内，微温溶解后，调节pH约6.0，煮沸，加葡萄糖,
溶解后，摇匀，滤清，调节pH值使灭菌后为5.8±0.2，分装，115℃灭菌30分钟。
上述培养基按40ml分装于试管中，装量约为试管高度的2/5，在115℃灭菌30分钟。
细菌培养基经30～35℃培养48小时，霉菌培养基经20～25℃培养72小时，应无菌生长；
放冰箱内备用。
培养基的质量检查
(1) 需气菌、厌气菌培养基经接种每1ml含100个以下的藤黄八叠球菌
【CMCC(B)28
001】菌液1ml，置30～35℃培养24小时后，应生长良好。
(2) 需气菌、厌气菌培养基经接种每1ml含50个以下的生孢梭菌
【CMCC(B)64 941】
菌液1ml，置30～35℃培养24小时后，应生长良好。
(3) 霉菌培养基经接种每1ml含50个以下的白色念珠菌菌液1ml，置20～25℃培养24
小时后，应生长良好。
对照用菌液
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)菌液
取金黄色葡萄球菌
【CMCC(B)26 003】的普通琼脂斜面新鲜培养物1白金耳，接种至
需气菌、厌气菌培养基内，在30～35℃培养16～18小时后，用灭菌的生理盐水稀释成1：
10。
供试液的配制
以无菌操作，称取本品5g，置研钵中，边研磨边加液体石腊（液体石腊,预先以160℃干热灭菌2小时）20ml，吐温-80 20ml，充分研磨均匀，再边研磨边加稀释剂60ml，初始每次约1ml，待起团块时，加入量增至约3ml，再轻轻研磨至乳化，将稀释剂加完为止。研磨均匀后，即得1：20供试液。
取1：20供试液10ml，加稀释剂40ml稀释，得1：100供试液。
检查法 取需气菌、厌气菌培养基200ml,接种1：100供试液10ml，在30～35℃增菌培养3日。
取增菌后的供试品溶液分别接种于需气菌、厌气菌培养基5管，其中1管接种对照用菌液1ml，作阳性对照；另接种霉菌培养基2管，接种后轻轻摇动，使匀。需气菌、厌气菌培养基在30～35℃培养5日；霉菌培养基在20～25℃培养7日。培养期间逐日检查是否有菌生长（阳性对照在24小时内应有细菌生长）；在加入供试品溶液后，培养基出现混浊或沉淀，经培养后不能从外观上判断时，应取该溶液转种于适宜的斜面培养基上，培养48～72小时后,观察有无菌落生长，并在转种的同时，取培养液少量,涂片制成染色标本，用显微镜观察是否有菌生长。
结果判断 当阳性对照管显浑浊并确有细菌生长时，可根据观察所得的结果判断；如需气菌、厌气菌及霉菌培养管均为澄清或虽显浑浊但经证明并非有菌生长、均判为合格；如需气菌、厌气菌及霉菌培养管中任何一管显浑浊并确证为有菌生长，应重新取样，分别依法复试2次，除阳性对照管外，其它各管均不得有菌生长，否则应判为不合格。
【附注】 1.稀释剂 1％吐温－80生理盐水 于100ml生理水中加入吐温80 1ml，分装后121℃加压灭菌20分钟。
2.无菌检查的全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物的污染。
3.供试品取样量不得少于2个包装。
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医药数据
